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[发明专利]细胞核插入诱变选育高产光合制氢莱茵衣藻的方法-CN201010183660.X无效
发明人：吴双秀;王荣荣;许丽丽;黄瑞;王全喜 -专利权人：上海师范大学
申请日： 2010-05-24 - 公布日： 2010-10-20 - 主分类号： C12N1/13 文献下载
摘要：本发明涉及生物制氢技术，细胞核插入诱变选育高产光合制氢莱茵衣藻的方法。现有的莱茵衣藻产氢率低，限制了生物光合制氢技术的应用和发展。本发明对莱茵衣藻细胞核进行随机插入诱变而获得高产氢突变株方法如下：莱茵衣藻培养；莱茵衣藻细胞核转化载体和玻璃珠的准备；莱茵衣藻细胞核转化和转化子筛选；分析莱茵衣藻转化子产氢培养的产氢量和耗氧量；分析莱茵衣藻突变株中ble基因的整合及其表达；分析重组豆血红蛋白hemH-1ba基因对莱茵衣藻生长的影响。本发明的优点是方法是：获得的高产氢莱茵衣藻生物制氢产量是原有的7倍；为深入研究莱茵衣藻产氢代谢机理提供了良好的实验材料和良好的基础条件。
细胞核插入诱变选育高产光合制氢莱茵衣藻方法

[发明专利]大豆血红蛋白基因提高莱茵衣藻生物制氢产量的方法-CN201010107922.4无效
发明人：吴双秀;阎光宇;许丽丽;黄瑞;王荣荣;王全喜 -专利权人：上海师范大学
申请日： 2010-02-09 - 公布日： 2010-09-29 - 主分类号： C12P3/00 文献下载
摘要：本发明属于生物制氢技术，一种大豆血红蛋白基因提高莱茵衣藻生物制氢产量的方法。现有莱茵衣藻制氢的缺点是：莱茵衣藻氢酶对氧气敏感，容易受氧气的抑制而失去活性；限制了衣藻的产氢效果。本发明公开了一个豆血红蛋白球蛋白亚基基因在莱茵衣藻产氢中的应用，将豆血红蛋白球蛋白亚基基因lba构建在莱茵衣藻叶绿体表达载体中，并将该表达载体转入莱茵衣藻叶绿体中，使lba基因在莱茵衣藻叶绿体中表达。转化的莱茵衣藻的密闭培养体系中氧气含量下降明显比未转基因莱茵衣藻快，并且氧气含量能维持较低水平，产氢量明显增加；本发明方法适用于所有产氢的微藻。
大豆血红蛋白基因提高莱茵衣藻生物产量方法

[发明专利]一种莱茵衣藻RAB7蛋白的多克隆抗体、制备方法和应用-CN202210595918.X在审
发明人：樊振川;鲍冬雪;张婵;孙维越;薛斌;刘雁霞 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2022-05-30 - 公布日： 2022-10-18 - 主分类号： C07K16/14 文献下载
摘要：本发明公开一种莱茵衣藻RAB7蛋白的多克隆抗体，所述多克隆抗体能够特异性识别莱茵衣藻RAB7蛋白；所述莱茵衣藻RAB7蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，所述莱茵衣藻RAB7蛋白的核苷酸序列如本发明莱茵衣藻RAB7蛋白多克隆抗体能特异性识别莱茵衣藻RAB7蛋白，且具有效价高和特异性好的特点；该莱茵衣藻RAB7蛋白多克隆抗体可用于莱茵衣藻RAB7蛋白的检测以及后续以莱茵衣藻为模式生物的RAB7
一种莱茵衣藻 rab7 蛋白克隆抗体制备方法应用

[发明专利]一株超高放氢藻株及其应用-CN201410014492.X有效
发明人：黄芳;赵磊;陈梅;张锦 -专利权人：中国科学院植物研究所
申请日： 2014-01-13 - 公布日： 2014-04-09 - 主分类号： C12N1/13 文献下载
摘要：本发明公开了一株放氢藻株及其应用。本发明提供重组莱茵衣藻，为将质粒pChlamiRNA3导入莱茵衣藻中，得到重组莱茵衣藻。所述莱茵衣藻为莱茵衣藻CC400。本发明的实验证明，本发明将pChlamiRNA3质粒转入莱茵衣藻藻种CC400（mt+）中，得到重组莱茵衣藻，且在重组莱茵衣藻中筛选得到突变藻株91号，在用气相色谱测定其产氢量时，突变藻株91号与野生型相比
超高放氢藻株及其应用

[发明专利]莱茵衣藻分泌型表达载体及分泌型表达系统的构建方法-CN201110070784.1有效
发明人：胡章立;吴锦霞;陈俊 -专利权人：深圳大学
申请日： 2011-03-23 - 公布日： 2011-09-14 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了莱茵衣藻分泌型表达载体及分泌型表达系统的构建方法，本发明利用来源于莱茵衣藻分泌型蛋白的氨基酸序列，通过信号肽预测软件预测其信号肽基因序列，对预测获得的信号肽基因进行人工合成，并将其插入到莱茵衣藻表达载体的启动子和克隆位点之间，构建了莱茵衣藻分泌型表达载体。同时，利用外源基因检测构建的莱茵衣藻分泌型表达载体的表达效率，将含有外源基因的莱茵衣藻分泌型表达载体，通过莱茵衣藻遗传转化法，转化到莱茵衣藻，经过筛选，获得能分泌表达外源基因的转基因工程藻株。本发明为利用莱茵衣藻作为生物反应器分泌表达外源基因奠定了基础。
莱茵衣藻分泌表达载体系统构建方法

[发明专利]豆血红蛋白亚铁螯合酶基因提高莱茵衣藻制氢产量的方法-CN201010115015.4无效
发明人：吴双秀;黄瑞;许丽丽;王荣荣;王全喜 -专利权人：上海师范大学
申请日： 2010-02-26 - 公布日： 2010-07-14 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明涉及生物制氢技术，一种豆血红蛋白亚铁螯合酶基因提高莱茵衣藻制氢产量的方法。现有莱茵衣藻制氢的缺点是：莱茵衣藻氢酶对氧气敏感，容易受氧气的抑制而失去活性；限制了衣藻的产氢效果。本发明公开了一种豆血红蛋白亚铁螯合酶基因和球蛋白亚基基因在莱茵衣藻产氢中的应用，将豆血红蛋白亚铁螯合酶基因hemH和球蛋白亚基基因lba构建在莱茵衣藻叶绿体表达载体中，并将该表达载体转入莱茵衣藻叶绿体中，使hemH-lba基因在莱茵衣藻叶绿体中表达。本发明的优点是：转化的莱茵衣藻的密闭培养体系中氧气含量下降地明显比未转基因莱茵衣藻快，并且氧气含量能维持较低水平，产氢量明显增加。
豆血红蛋白亚铁螯合酶基因提高莱茵衣藻制氢产量方法

[发明专利]一株稳定高表达外源基因的莱茵衣藻突变株及其构建方法-CN202310158387.2在审
发明人：潘俊敏;李学成;温馨;肖奕博;屈玉娇 -专利权人：清华大学;深圳元育生物科技有限公司;珠海元育生物科技有限公司
申请日： 2023-02-23 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： C12N1/13 文献下载
摘要：本发明提供一株稳定高表达外源基因的莱茵衣藻突变株，该突变株为敲除了莱茵衣藻出发株中SRTA基因后得到的突变藻株，具体是将莱茵衣藻出发株的SRTA基因被替换为包含三个终止密码子的核苷酸序列，为：5’‑TGACGCTAGGGCTGAGCCTCGA该莱茵衣藻出发株可为莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)野生型、突变藻或转基因工程株。此外，本发明还提供一种稳定高表达外源基因的莱茵衣藻突变株的构建方法。该莱茵衣藻突变株可高表达外源基因，传代稳定性高，具有较长纤毛，能与其他藻种杂交，培养时其生长速度与出发株相当，是一种提供外源蛋白的表达的优良底盘藻株。
稳定表达基因莱茵衣藻突变及其构建方法

[发明专利]一种验证莱茵衣藻AANAT基因抗盐功能的方法及载体-CN201910406105.X在审
发明人：王英娟;冯政;高文英;贺瑾瑾;白庆庆 -专利权人：西北大学
申请日： 2019-05-16 - 公布日： 2019-08-13 - 主分类号： C12N15/82 文献下载
摘要：本发明公开了一种验证莱茵衣藻AANAT基因抗盐功能的方法，步骤一、构建含目的基因AANAT的莱茵衣藻核表达载体pDBle‑aanat；步骤二、将步骤一中的核表达载体pDBle‑aanat导入莱茵衣藻细胞核基因组中，筛选获得AANAT基因沉默的转基因藻株；步骤三、选取野生莱茵衣藻和步骤二中所述的转基因藻株；将野生莱茵衣藻和转基因藻株分别在含有相同浓度NaCl的TAP培养液中培养，得藻液；步骤四、取部分各所述藻液，处理后，检测，确定转基因藻株的抗盐能力，验证莱茵衣藻AANAT基因抗盐功能。采用该方法为后期在莱茵衣藻中褪黑素研究提供了藻细胞材料，便于准确的研究AANAT基因与褪黑素合成之间的关系。
莱茵衣藻转基因藻抗盐基因验证核表达黑素藻液培养液细胞核基因组基因沉默目的基因藻细胞构建合成筛选研究检测

[发明专利]一种莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT38的多克隆抗体、应用和方法-CN202110630817.7有效
发明人：樊振川;孙维越;刘雁霞;薛斌;张瑞凯;王慧 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2021-06-07 - 公布日： 2022-12-13 - 主分类号： C07K16/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种莱茵衣藻纤毛内运送蛋白IFT38的多克隆抗体，其制备步骤如下：构建重组表达载体，该重组表达载体的核苷酸序列包括SEO ID NO.2所示的序列；将所述表达载体转化至大肠杆菌感受态细胞BL21中，得到重组表达菌株；诱导所述重组表达菌株的蛋白表达，得到莱茵衣藻IFT38蛋白；将所述莱茵衣藻IFT38蛋白经过亲和纯化后作为免疫原免疫动物，得到莱茵衣藻IFT38蛋白多克隆抗体。本发明多克隆抗体能特异性识别莱茵衣藻IFT38蛋白，且具有效价高和特异性好的特点；该莱茵衣藻IFT38蛋白多克隆抗体可用于莱茵衣藻IFT38蛋白的检测以及后续以莱茵衣藻为模式生物的IFT38蛋白的功能研究
一种莱茵衣藻纤毛运送蛋白 ift38 克隆抗体应用方法

[发明专利]一种生产虾青素的工程莱茵衣藻及其应用-CN202310249966.8在审
发明人：肖奕博;屈玉娇;邓银露 -专利权人：深圳元育生物科技有限公司;珠海元育生物科技有限公司;北京元育生物科技有限公司
申请日： 2023-03-15 - 公布日： 2023-07-18 - 主分类号： C12N1/13 文献下载
摘要：本发明涉及一种生产虾青素的工程莱茵衣藻，该工程莱茵衣藻为：将莱茵衣藻出发株内源BKT基因抑制其表达的尾端片段切除后进行密码子优化，得到优化的表达BKT酶的多核苷酸片段，再将该多核苷酸片段转入莱茵衣藻的细胞核或叶绿体的基因组中所得的工程莱茵衣藻本发明为虾青素的合成提供了确实可行的新途径，通过本发明的方法成功在莱茵衣藻中构建虾青素细胞工厂，解决了莱茵衣藻不能直接作为底盘藻株进行虾青素合成的问题，解决了雨生红球藻规模化培养过程中养殖周期长、调控技术复杂
一种生产虾青素工程莱茵衣藻及其应用

[发明专利]表达人组织激肽释放酶的转基因莱茵衣藻的构建方法-CN200810066705.8有效
发明人：胡章立;吴锦霞 -专利权人：深圳大学
申请日： 2008-04-11 - 公布日： 2008-09-03 - 主分类号： C12N15/57 文献下载
摘要：本发明为一种表达人组织激肽释放酶的转基因莱茵衣藻的构建方法，首先根据人组织激肽释放酶基因序列和莱茵衣藻偏爱密码子表，设计适合于莱茵衣藻核基因组表达或叶绿体基因组表达或线粒体基因组表达的人组织激肽释放酶基因序列，并通过人工合成的方法合成该基因序列及人工合成含有非编码序列的人组织激肽释放酶基因，然后构建含有上述外源目的基因的莱茵衣藻核表达载体或莱茵衣藻叶绿体表达载体或莱茵衣藻线粒体表达载体，再通过遗传转化方法，转化到莱茵衣藻中，经过筛选，获得能表达人组织激肽释放酶的转基因工程藻株。本发明为利用转人源激肽释放酶基因莱茵衣藻及其加工产品对某些疾病如高血压、肾小球肾炎等进行预防和治疗奠定了基础。
表达组织激肽释放酶转基因莱茵衣藻构建方法

[发明专利]一种用于转化莱茵衣藻的AANAT基因植物双元表达载体及其构建方法-CN201710091283.9有效
发明人：王英娟;张雨靖;高文英;杨泽熵;吕亚维 -专利权人：西北大学
申请日： 2017-02-21 - 公布日： 2020-07-28 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明公开了一种含有莱茵衣藻褪黑素合酶AANAT基因的植物双元表达载体。其将莱茵衣藻褪黑素合酶AANAT基因、博莱霉素抗性基因Ble和植物双元表达载体pRI101‑AN重组得到表达载体pRI101‑AANAT。本发明以莱茵衣藻为受体，以农杆菌介导法为方法，可以实现外源AANAT基因转入野生型具有细胞壁的莱茵衣藻的基因组，从而增加莱茵衣藻中的褪黑素含量，为研究转基因藻株中褪黑素含量变化及探索褪黑素在莱茵衣藻中的功能奠定了基础
一种用于转化莱茵衣藻 aanat 基因植物表达载体及其构建方法

[发明专利]一种莱茵衣藻重金属镉吸附突变体的筛选方法-CN201611022254.9在审
发明人：陈斌;李丽丽;胡长峰 -专利权人：江汉大学
申请日： 2016-11-16 - 公布日： 2017-07-21 - 主分类号： C12N15/87 文献下载
摘要：本发明公开了一种莱茵衣藻重金属镉吸附突变体的筛选方法，所述筛选方法包括根据不同氯化镉浓度对莱茵衣藻生长的影响，选择合适的重金属镉吸附突变体筛选浓度；电击转化获得莱茵衣藻突变体；筛选出莱茵衣藻重金属镉吸附突变体，所述筛选出莱茵衣藻重金属镉吸附突变体包括筛选重金属镉敏感型突变体和筛选重金属镉抗性突变体；鉴定筛选出的莱茵衣藻重金属镉吸附突变体的突变基因。本发明达到了能够简单、高效地获得大量的衣藻重金属镉吸附突变体的技术效果。
一种莱茵衣藻重金属吸附突变体筛选方法

[发明专利]莱茵衣藻油脂代谢基因CrDGAT2-5及其编码蛋白与应用-CN201110276683.X无效
发明人：邓晓东;费小雯;辜博;罗秋兰 -专利权人：中国热带农业科学院热带生物技术研究所
申请日： 2011-09-16 - 公布日： 2012-01-18 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明涉及一种莱茵衣藻油脂代谢基因CrDGAT2-5及其编码蛋白与应用，所述莱茵衣藻油脂代谢基因CrDGAT2-5是以JGI莱茵衣藻基因数据库公布的au.g4218_t1基因为模板进行扩增cDNA获得，其序列如SEQ ID NO：1所示的核苷酸；其编码蛋白是根据其碱基序列分析而推测编码CrDGAT2-5蛋白质序列，其序列如SEQ ID NO：2所示的氨基酸残基序列的蛋白质；将该基因运用于莱茵衣藻进行植物表达可以显著提高莱茵衣藻中中性脂含量和生物量本发明以JGI莱茵衣藻基因数据库公布的au.g4218_t1基因为模板进行扩增cDNA获得莱茵衣藻油脂代谢基因CrDGAT2-5，运用于莱茵衣藻中可以显著提高中性脂含量和生物量，对提高微藻含油量以及品质具有重要意义
莱茵衣藻油脂代谢基因 crdgat2 及其编码蛋白应用

[发明专利]一种高产氢莱茵衣藻蛋白及其编码基因与应用-CN201410108048.4有效
发明人：黄芳;陈梅;赵磊;张锦 -专利权人：中国科学院植物研究所
申请日： 2014-03-21 - 公布日： 2014-06-25 - 主分类号： C07K14/405 文献下载
摘要：本发明公开了一种莱茵衣藻蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的莱茵衣藻蛋白是如下a）或b）：a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；b）将a）所限定的蛋白质的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加，且与衣藻产氢相关的蛋白质实验证明，SHH1基因表达量低的莱茵衣藻突变藻株91号CGMCC NO.8706，其产氢量为野生型莱茵衣藻CC400的5倍；当向莱茵衣藻突变藻株91号CGMCC NO.8706中转入SHH1基因得到的互补莱茵衣藻的产氢量恢复到野生藻的水平这表明SHH1基因在衣藻产氢中有重要功能，这为工程藻株的改造提供了一个很好的靶标基因。
一种高产氢莱茵衣藻蛋白及其编码基因应用

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